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研究进展
国内研究 | 国外研究 | 其它资料
随着秋冬季节的来临，甲流可能会在全球进一步蔓延并造成更多的伤害和死亡。因此，全球加紧了对这一病毒发病机制、诊断技术、防控措施和新药研制的脚步。
捷克斯洛伐克最近通过对感染H1N1小鼠的观察和2003至2004年间感染H3N2病毒的人群的调查发现，PB1-F2抗体能在小鼠的感染早期和感染人群的康复期大量发现，提示大量的该抗体能引起抗流感病毒免疫反应。印度还通过对高致病甲型H5N感染模型，进一步研究了线粒体膜蛋白的分子交互作用在PB1-F2蛋白诱导的细胞凋亡中的作用。近日美国学者进行了一项蛋白多糖交互作用在流感免疫机制中作用的研究，这一成果可能帮助人们把这一生物过程变成可控。美国7月份还提出要通过将近100条人类相关基因作为候选基因，以期对甲型流感的基因基础与免疫性进行研究。而此研究是以已发表文献中关于甲型流感病毒感染的发病机理（粘合病毒至宿主细胞表面的受体；宿主蛋白酶裂解血凝素；宿主细胞内的病毒复制；宿主细胞凋亡；个别宿主的免疫活性；病毒感染诱发的细菌感染）为基础的。
由于2009年4月至5月，采用反转录聚合酶链反应对65例甲型流感H1N1病毒感染的临床病例进行了诊断测试。结果发现尽管快速诊断试验的阳性结果可对临床治疗作出指导，但其阴性结果并不能排除异常甲型流感H1N1病毒感染。因此对阴性感染者应凭经验进行临床猜测，必要时应借助反转录聚合酶链反应或病毒隔离，而甲型流感H1N1病毒的快速诊断试验的准确性有待于进一步评估。
美国研究者在对甲型H3N2和H1N1病毒感染的年龄分布研究中发现，H1N1病毒引起的流感多发在9岁左右的人群，比H3N2多发年龄23岁要年轻。这一结论是从过去的报道中统计得出的。当前甲流仍在全球蔓延，这一研究发现有助于建立高危人群风险评估模式和年龄相关的疾病防控新网络。2009年8月24日，美国疾病控制与预防中心(CDC)的免疫实务咨询委员会(ACIP)提出新型A型流感(H1N1)病毒疫苗的使用指南。该指南围绕着甲流疫苗的供应和使用提供了较为详细和全面的指导意见，旨在重点保护易感人群和高危人群以有效控制甲流的继续蔓延。
最近，关于对金刚烷胺产生抗药性的病毒株的报道不断增多，为找出其作用机制，日本学者对甲型流感病毒的M基因序列进行了分析。研究分析了5000多份病毒的测序结果，并绘制了系统发生树。结果表明：M基因抗药性的出现与传播是独立的，且不通过重组。近来增加的抗药病毒与基因31氨基酸位置有关，因此抗药性可能与药物的使用无关。8月6日美国有两名甲流患者在使用流感预防药物磷酸Oseltamivir(药物名：Tamiflu)之后出现了感冒症状中断的情况。在随后的观察中发现两位患者体内的病毒在治疗开始就受到Oseltamivir的影响，其抵抗力也迅速增加。8月11日，焦磷酸测序、神经氨酸酶基因测序和抑病毒的神经氨酸酶菌株测试均证明这一抗病毒过程的发生。8月11日《英国医学杂志》报道了几起Oseltamivir药物不良反应病例。日本通过在各种哺乳动物中进行药理实验，认为CA04是可以作为抗击甲流的一线药物。8月13日，Virol J报道了聚维酮碘对抗人和禽的甲型流感病毒机制的最新研究成果。报道称，聚维酮碘是通过对凝血反应和唾液酸酶的影响达到抗病毒的作用。这一研究也进一步证实了聚维酮碘在控制人和禽甲型流感病毒传播中的效果。
--国内研究--
中药抗病毒研究
山东中医药大学采用亚洲甲型鼠肺适应株(A/PB/8/H1N1)滴鼻感染小鼠的方法制作小鼠病毒性肺炎模型。将模型随机分组。与银翘解毒颗粒进行对比，光学显微镜下观察小鼠服用清营解表合剂（金银花、连翘、白薇、生地、麦门冬等）前后肺组织的病理变化，同时计算小鼠肺指数，比较同一时相不同组间及不同时相同一组内肺指数的变化趋势。从而研究清营解表合剂对流感病毒A/PR/8/H1N1的作用。北京中医药大学东直门医院采用在昆明小鼠中注射鸡胚传代后的病毒血清A/PR/8/34(H1N1)制作流感病毒感染模型。将模型随机分组。与病毒唑(利巴韦林片)对比，通过检测HA抗体、神经氨酸酶抗体，观察清肺饮（由炙麻黄、炒杏仁、黄芩、虎杖、连翘、僵蚕等12味中药）对小白鼠血凝素抗体、神经氨酸酶抗体的影响。
北京中医药大学将实验小鼠感染流感病毒，给药组予龙芩草喷雾剂，阳性对照药组给利巴韦林，病毒对照组给生理盐水，计算死亡率、保护率、延长生命率及肺部病变抑制率，并将所得数据进行统计学处理。发现龙芩草喷雾剂能显著降低感染流感病毒A1型(H1N1)小鼠肺部病变抑制率、死亡率，并提高延长生命率，统计学处理结果显示，给药组和阳性对照药组与病毒对照组相比具有显著性差异(P<0。01)。说明龙芩草喷雾剂具有显著的抗流感作用。广州中医药大学和泸州医学院附属医院用甲1亚型流感病毒FM1株建立小鼠流感动物模型。实验小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、病毒唑组、桂枝汤组、麻黄汤组、桂枝麻黄各半汤组，分别观察上述三方对小鼠病毒性肺炎及其生存的影响。发现以肺指数为评价指标，桂枝汤组、麻黄汤组、桂枝麻黄各半汤组分别与模型对照组相比有显著性差异(P<0。01)；三方各组之间比较以及三方各组和病毒唑组比较无显著性差异。不同处理组间死亡数和存活时间除麻黄汤组与病毒唑组比较有显著性差异外(P<0。05)，其余各组间无显著性差异。说明三方在体内均有抗甲1亚型流感病毒小鼠肺炎的作用，但三方的疗效并无差异性。麻黄汤与病毒唑的疗效相比有显著性差异。三方对小鼠感染甲1亚型流感病毒FM1株的死亡保护作用和延长生命作用均不明显。甘肃农业大学动物医学院和中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所用MTT染色法测定大青叶中4(3H)喹唑酮通过不同加药方式对H1N1型流感病毒的体外抑制作用。发现大青叶中4(3H)喹唑酮对H1N1型流感病毒具有明显的阻断作用和对细胞内病毒有抑制作用。认为大青叶中4(3H)喹唑酮具有明显的体外阻止H1N1型流感病毒吸附到靶细胞和抑制H1N1型流感病毒增殖的作用。
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基因结构与变异
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所研究了2002年我国内地从猪群中分离的猪型(H1N1)毒株HA和NA基因来源，及其使猪致病的原因。他们发现3株猪型病毒的HA和NA基因来源于猪型(H1N1)毒株，而近些年猪型毒株对猪具有致病性和活动增强是由于其HA和NA蛋白分子上氨基酸序列发生替换所造成。中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所将截断的人源RNA多聚酶Ⅰ的启动子与鼠源RNA多聚酶Ⅰ终止子序列嵌套在RNA多聚酶Ⅱ的启动子与终止序列之间，构建成质粒载体系统。将甲型流行性感冒病毒A/PR/8/34(H1N1)全基因组8个基因节段的互补DNA(cDNA)克隆入该系统，共转染共培养的293T(人胚肾细胞)和MDCK(狗肾传代细胞)细胞。利用细胞的酶系统重拯出具有感染活性的流感病毒颗粒。在MDCK细胞上滴定病毒滴度。结果发现该转染过程完善了流感病毒的反向遗传操作系统。同时，应用该系统在体外完全利用病毒的cDNA在无辅助病毒的情况下cDNA成功包装出具有感染活性的流感病毒。广州广东省疾病预防控制中心从流感病人体内分离流感病毒(A/Guangdong/376/2001/H1N1)，提取RNA，用特异引物进行RT-PCR，扩增HA基因，先将其克隆到pMD18-TVector，进行序列测定和分析；然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo)，进行鉴定。结果获得一个核苷酸长度为1698bp的基因，编码565个氨基酸；同源性比较结果表明:和A/HongKong/1131/98(GenBank/NCBI:AF386775)有98%同源，序列分析表明有10个氨基酸出现变异；酶切和序列测定表明HA基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN)。说明HA基因真核表达载体的成功构建，可以进一步研究其免疫功能。中国预防医学科学院病毒学研究所采用病毒粒RNA经逆转录合成cDNA，经聚合酶链反应(PCR)扩增并将产物纯化，然后采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果所比较的7个不同RNA节段中，测定毒株RNA6和7的核苷酸序列与A/PR/8/34(H1N1)完全相同。而RNA1，2，3，5和8间核苷酸差异数分别为20，5，11，7和6。这些差异导致了所编码的PB2，PB1，PA，NP和NS蛋白分子上氨基酸序列差异数分别为10，2，1，0和4。说明A/广东/6/91(H1N1)毒株由A/PR/8/34(H1N1)病毒实验室污染而来可完全加以排除。它是A/PR/8/34(H1N1)病毒类似毒株，而不是基因重配株。
中国预防医学科学院病毒学研究所于1992年首次从我国猪群中分离20株猪型(H1N1)流感病毒并对其来源进行调查。抗原性和核酸点杂交分析表明，新分离毒株8个基因节段均来源猪的流感病毒，而不是来自禽和人的流感病毒，也不是由猪和禽或人流感病毒重组而来。根据毒粒Np基因的核苷酸全序和Np蛋白氨基酸全序分析指出，新毒株的Np基因和Np蛋白与当前美国猪群中流行的猪型毒株很相似，而与古典的猪型毒株有差异。因此推测新病毒可能是通过猪种交换，当时由国外猪群传入我国。血清学调查表明，新病毒至少在北京猪群中已传播得相当广泛。并且强调猪型流感病毒既可感染猪，又可感染人，因它在我国猪群中出现，所以应引起我们的重视。1997年中国预防医学科学院病毒学研究所通过血清学鉴定和分析1991年5月从1名上呼吸道感染的儿童患者中分离出的1株流感病毒，发现A/广东/6/91(H1N1)毒株不是由A/PR/8/34(H1N1)通过实验室污染而来。为了研究H1N1亚型SIV遗传演化与变异的特性，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所采用RT-PCR技术分别扩增A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)的8个基因片段，分别将其克隆到pMD18-T载体，进行全基因组序列测定。核苷酸序列测定结果显示:LM株SIV各基因片段均未发现核苷酸插入或缺失现象。HA切割位点处的氨基酸序列序列为IPSIQSR↓G，与高致病性SIV的H1N1亚型毒株的分子特征不符合。HA基因含有6个潜在的N-糖基化位点，4个在HA1的第11、23、87、和276位，增加2个分别在HA2的154和213位点；NA基因不仅在58、63、68、88和146位含有高度保守的N-糖基化位点，而且在44和235位增加2个潜在的N-糖基化位点，这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。核苷酸同源性结果显示:HA基因与类人谱系的流感病毒分离株有很高的同源性(99%)，而其他基因均与古典猪谱系的流感病毒分离株同源性较高(87%－98%)。从绘制的各个片段进化树和核苷酸同源性分析结果，可以推测该毒株HA基因可能来源于类人谱系的流感病毒；而其他基因来源于古典猪谱系的流感病毒。华南农业大学兽医学院和佛山科技学院测定了A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)猪流感病毒的部分生物学特性；运用RT-PCR方法扩增其HA基因，并对其进行了克隆和序列分析。结果表明，该株病毒的EID50/0。2mL及TCID50/0。1mL分别为10^-2。3和10^-2。1，小鼠感染试验亦说明该病毒具有致病性。序列分析表明，HA基因全长为1701bp，与国内外流行株同源性达90。8%－99。0%。
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所为了解1981－2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征，选取H1N1甲型流感病毒370株，提取病毒RNA，经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序，测定的序列用生物信息软件分析，与GenBank中相关序列比较，并对推导的编码氨基酸序列进行基因特性分析。结果表明，HA1氨基酸的变异表现为抗原决定簇4个区均有变异，Sb区和Ca区变化较大；HA1受体结合位点(RBS)的前壁130环的第134位赖氨酸从1991年起在部分毒株HA1序列上开始缺失，以后缺失株逐步增多，自2000年起测定的所有毒株上该氨基酸全部缺失，同时这些缺失株的第137位氨基酸也全部由苏氨酸替换为丝氨酸；糖基化位点从增多到减少，最后稳定在7个；1981－2004年我国H1N1甲型流感病毒血凝素HA1编码的氨基酸在种系发育树上同年代基本呈现集中分布，与时间和地域无关，2005年毒株分成两个分支在时间上有明显差异。
2008年《生物工程学报》内首次报道我国实验室拯救出H1N1亚型猪流感病毒，为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。华南师范大学、广东省中医院、广州医学院第一附属医院、广州呼吸疾病研究所、广州中医药大学和暨南大学联合开展研究。用SPF鸡胚增殖毒株，提取病毒基因组总RNA，应用RT-PCR技术扩增该病毒株的HA基因，并克隆到pMD18-T载体上，测定HA基因核苷酸序列。结果发现该毒株的HA基因全长为1677bp，含有完整的阅读框架，编码545个氨基酸；BLAST序列比对结果显示。该毒株HA基因与其他H1基因核苷酸的同源性为98%。认为该毒株HA核苷酸序列发生了变异，出现多处碱基替换，可能是病毒毒力增强的原因。
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所对2004-2005年分离的A(H1N1)亚型毒株先进行单向血凝抑制试验；在此基础上选取不同时间、地点的A(H1N1)亚型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列，然后进行基因进化特性分析。单向血凝抑制实验结果表明，2004年A(H1N1)亚型病毒株对鉴定血清的血凝抑制效价与A/Shanghai/1/1999(H1N1)毒株没有4倍差异；2005年分离的A(H1H1)亚型毒株中有62株(占6。2%)病毒与A/Shanghai/1/1999(H1N1)毒株本身的血凝抑制效价相比有4倍差异。HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明，我国2005年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异，54K>R、90T>K、101Y>H、149R>K、169V>A、190D>N、212R>K、219K>R、245W>R、246Y>F、258T>N、318V>A，其中54、190位氨基酸位于抗原决定簇。可见我国2005年分离的A(H1N1)亚型流感毒株基因特性和抗原性已开始发生变异。
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甲流流行病学
中国预防医学科学院病毒学研究所于1998年从全国8个不同地区采集1975年之后出生人的血清，用常量半加敏HI测定A/PR/8/34(H1N1)毒株的抗体，然后凡HI效价≥10的血清，一律按同法对A/Swine/Iowa/15/30(H1N1)、A/桂富/10/194(H1N1)和A/京防/53/97(H1N1)毒株进行复核测定。结果有24份血清HI效价≥20，分布于8个不同地区。可见当时我国人群中存在有A/PR/8/34(H1N1)毒株的活动。宁夏疾病预防控制中心和江苏省疾病预防控制中心对2004—2005年宁夏A(H1N1)亚型流感病毒基因特进行性研究，以了解该地区流行的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素基因变异情况。通过对分离的A(H1N1)亚型毒株随机选取5株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列，然后进行基因进化特性分析发现HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明，宁夏2004年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异，35D>N、152G>R、182P>S、221D>G，其中152、221位氨基酸位于抗原决定簇2005年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异，82T>K、94Y>H、119K>N、145R>K、165V>A、208R>K、251W>R、266T>N，其中165位氨基酸位于抗原决定簇。说明宁夏2004—2005年分离的A(H1N1)亚型流感毒株基因特性和抗原性已开始发生变异。邯郸市疾病预防控制中心和河北省疾病预防控制中心病毒病防治所研究了2005－2006年河北省分离的H1N1型流感病毒毒株HA1基因特性。发现H1N1型流感病毒HA1基因已发生明显变异，但对抗原性改变意义不大；近几年H1N1持续低流行使人群易感性得以积累是今年H1N1型流感流行的主要原因；2005－2006年河北省同时流行着至少2支种系发生距离较远的H1N1型流感病毒。郑州大学公共卫生学院和深圳市疾病预防控制中心研究了2005—2007年深圳市H1N1流感病毒HA1基因变异特征。发现这一时段该地区人群中至少有3个类型HA1基因不同的H1N1流感病毒株；由于氨基酸变异引起病毒发生抗原漂移，其代表株为A/GDLH/219/2006；发现的A/SZ/68/2007病毒毒株具有特殊性，其抗原特性和流行病学意义还有待探讨。深圳市卫生防疫站将病毒粒RNA经逆转录合成cDNA，用PCR扩增，产物纯化。同时采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定并推导出其所编码的氨基酸序列。用DNA-STAR公司出品的序列分析软件，MegAlign(1。03版)的Editseq(3。69版)进行进化树分析。结果发现根据病毒粒HA1基因特性，至少1995年以来深圳地区人群中同时流行着基因特性不同的三系毒株；1995-1997年H1N1毒株与A/新加坡/6/86(H1N1)病毒相比较，其HA1蛋白分子上第54和155位上分别插入和缺失一个糖基化点，同时氨基酸序列发生了替换。说明上世纪九十年代来深圳地区人群中同时流行着HA1基因不同的三系H1N1亚型毒株。由于HA1蛋白分子上氨基酸序列发生了替换，尤其糖基化位点插入和缺失，造成1995年以来H1N1毒株活动加强，这些可能与毒株“O”相特性再现密切相关。通过开展流感甲3(H3N2)和甲1(H1N1)型的临床流行病学调查，分析不同亚型流感引起的临床反应、不同亚型体温及病程的关系和不同亚型与合并症的关系，结果发现甲3型(H3N2)和甲I型(H1N1)的临床反应在症状上的排序稍有不同，而且甲3型(H3N2)其症状发生率比甲I型(H1N1)要高．但经统计学处理除头痛外其余无显著性差异。不过在合并症发生率上甲3型(H3N2)与甲I型(H1N1)的差异是明显的。是否与(H1N1)是旧亚型的重现，故它的传播力引起合并症能力也有限的缘故。
解放军第262医院于1997年10月-1998年3月，从北京青年中分离到6株H1N1流感亚型毒株，经国家流感中心鉴定确认。将6株中的5株与1994-1997年3株(H1N1)国家代表株作血凝抑制交叉试验，5株的抗原性明显不同于A/桂防/10/94，抗原比均≥2。5株中的4株抗原性明显不同于A/京防/25/96；5株中的2株抗原性明显不同于A/京防/53/97。将6株H1N1流行株送日本WHO流感协作中心作多株H1N1毒株抗原性初步分析，6株抗原性既不同于A/日本山形/120/86和A/日本山形/32/89，也不同于国际代表株德国的A/拜恩州/07/95和南非的A/约翰内斯堡/82/96。表明H1N1流感亚型毒株自1994年以来抗原变异较大，需严密监测。中国预防医学科学院病毒学研究所病毒RNA经逆转录合成cDNA，利用聚合酶链反应(PCR)进行扩增，产物纯化，采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定，最后用DNASTAR公司出品的序列分析软件MegAlign(1。03版)和Editseq(3。69版)对核苷酸序列进行分析。检查结果未见到“O”、“D”相毒株HA1蛋白分子间有特殊氨基酸的差异。但1995年前后毒株在-2，-7，130和139位存在有差别。同时还发现了，自1995年以来，在我国人群中同时流行着两种HA基因不同的H1N1亚型流感病毒:一种与1995年之前所分离到的H1N1病毒相比较，其HA1区蛋白分子上氨基酸没发生任何丢失，另一种在第130位丢失一个氨基酸。说明未发现H1N1亚型病毒“O”、“D”相毒株HA1区蛋白分子间有特殊氨基酸的差异。发现了自1995年以来，我国人群中同时流行着两种HA基因不同的H1N1亚型毒株。
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甲流诊断
华中师范大学采用鸡胚进行病毒分离，采用血凝试验初步确定病毒效价，用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)扩增分离株的部分片段后进行克隆和测序，然后进行进化树分析。从采集的80份新鲜鸟粪便中分离到一株低致病性流感病毒，其编号为WH-1，结果测出的部分NP基因序列经Blast比较，与A/Canterbury/106/2004/H1N1的同源性最高，核苷酸为99%，氨基酸为100%，与GenBank中收录的AIV其它病毒株NP基因相应片段的同源性在96%以上。说明分离得到WH-1为一株新的甲型流感分离毒株，该分离株可以用RT-PCR方法进行检测。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所和东北农业大学动物医学院对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、HIN2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析，分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域，设计扩增猪流感病毒H1和H3、NI和N2亚型的2套多重PCR特异性引物，建立了猪流感H1N1、HIN2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法，同时用试验证明建立的猪流感病毒H1N1、HIN2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法，可用于临床样品的早期快速诊断和分型。河南农业大学牧医工程学院和漯河出入境检验检疫局根据GenBank中H1N1亚型猪流感病毒NP基因的序列(DQ889686)，利用Premierexpress设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针，从猪流感病毒HN407株接种的鸡胚尿囊液中提取总RNA，经RT-PCR扩增NP基因。将鉴定正确的NP基因片段克隆入pGEM-TEasy载体中，转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒。以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线。对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化，建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序。经临床应用表明荧光定量PCR的建立为早期诊断猪流感病毒、定量分析猪流感病毒感染程度奠定了基础。华南农业大学动物科学学院和中山大学生命科学学院采用RTPCR方法扩增了H1N1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的血凝素(HA)基因，测序后对HA基因进行了生物信息学分析。将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上，成功构建重组表达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，用IPTG进行诱导表达。诱导表达的HA融合蛋白分子质量约为94。0ku，表达产物占菌体总蛋白的29。5%。经Western-blot分析证实可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单克隆抗体的筛选，成功筛选到2株针对HA蛋白抗原表位的单克隆抗体；ELISA结果表明，制备的SIV单克隆抗体ⅢF6A4C10与H1N1亚型SIV抗原具有特异的免疫反应性，为H1N1SIV的鉴别诊断奠定了基础。
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甲流疫苗
2006年，华南农业大学兽医学院和佛山科学技术学院应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因9并克隆到pMD18-TSimple载体中，经PCR、酶切和测序验证克隆正确后，亚克隆到真核表达载体pcDNA3。1(+)中，构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞。间接免疫荧光试验结果表明，血凝素基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达，这为猪流感病毒DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。
军事医学科学院微生物流行病研究所和扬州大学畜牧兽医学院将其研究室已构建好的重组质粒pVAX1-HA及pVAX1-NA双酶切后得到HA、NA基因，将其克隆入asd-pVAX1构建重组的表达质粒。将重组质粒转染COS-7细胞，用免疫细胞化学方法鉴定重组质粒体外的表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550，以2×10^9CFU/只的剂量三次口服免疫Balb/c小鼠。结果表明asd-pVAX1-HA和asd-pVAX1-NA均能在COS-7细胞中表达；免疫小鼠不仅可以检测到HA、NA特异性的血清IgG及Iga抗体；刺激黏膜免疫反应，产生sIgA抗体，而且能抵抗40LD50同型病毒滴鼻的攻击。说明H1N1流感病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌运送系统在体内能够成功释放所携带的质粒，并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。
甘肃农业大学动物医学院和中国农业科学院哈尔滨兽医研究所应用已构建的真核表达质粒pCI-H1-HA、pCAGGS-H1-HA、pCI-H3-HA和pCAGGS-H3-HA作为DNA疫苗，利用BALB/c小鼠进行免疫保护试验，通过测定不同免疫期HI抗体滴度、分析攻毒后BALB/c小鼠体重变化及肺脏病毒含量，评价DNA疫苗的免疫效力。研究结果表明，构建的DNA疫苗均可诱导小鼠产生免疫力；BALB/c小鼠体重变化统计学分析显示，免疫组与对照组差异极显著(P<0。01)，pCAGGS表达载体构建的DNA疫苗免疫效果优于pCI表达载体构建的DNA疫苗(P<0。05)。
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病毒灭活
福州大学光催化研究所和生物科学与工程学院利用滴度测定和透射电镜观察研究了365nm的紫外光照射下TiO2对流感病毒(H1N1)的灭活性能，并结合催化剂样品的XRD分析、N2气吸附性能测定及其在实验条件下的表面Zeta电势的测量结果，探讨了催化剂用量、焙烧温度、比表面积以及表面电性与灭活性能的关系。研究发现400℃时焙烧的TiO2对H1N1的灭活性最好；TiO2的表面电性对灭活性有显著影响；TiO2对H1N1的光催化灭活作用首先发生在H1N1的纤突部分，纤突部分的破坏导致H1N1的失活，分解直至矿化。
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--国外研究--
2009年3、4月间始发于墨西哥和美国的甲型H1N1(Influenza A H1N1)流行性感冒（4月30日前叫“猪流感”）迅速将全球的关注点从金融危机转向这个既老又新的病毒性传染病。该病发病快，传播迅猛。
甲型H1N1是甲型(A型)流感病毒(influenza A virus)引起的猪或人的一种急性人畜共患呼吸道传染性疾病，该病毒属于正粘病毒科，甲型流感病毒属。目前，随着流感的进一步流行，Muhammed Babakir-Mina Salvatore Dimonte指出甲型H1N1病毒是包含禽流感、人流感、猪流感三种流感病毒的基因片段的新毒株；科学家们对新型H1N1流感病毒的HA蛋白进行结构定位和空间表位分析发现在静电势下，HA蛋白与以前的流感病毒蛋白有明显的不同；日本学者对甲型流感病毒的M基因序列进行了分析，研究分析了5000多份病毒的测序结果，并绘制了系统发生树。
甲型H1N1流感的诊断目前WHO规定通过实验室检查确诊有2009H1N1病毒的，便可以明确诊断。可是科学家在2009年4月至5月发现，尽管采用反转录聚合酶链反应对65例甲型流感H1N1病毒感染的临床病例进行了诊断测试，但其阴性结果并不能排除异常甲型流感H1N1病毒感染。因此对阴性感染者应凭经验进行临床猜测，而甲型流感H1N1病毒的快速诊断试验的准确性有待于进一步评估。
甲型H1N1流感治疗比较有效的药物是乐感清和奥司他韦。但是最近，关于对金刚烷胺产生抗药性的病毒株的报道不断增多，8月6日美国有两名甲流患者在使用Oseltamivir(药物名：Tamiflu)之后出现了感冒症状中断的情况。在随后的观察中发现两位患者体内的病毒在治疗开始就受到Oseltamivir的影响，其抵抗力也迅速增加。8月11日，焦磷酸测序、神经氨酸酶基因测序和抑病毒的神经氨酸酶菌株测试均证明这一抗病毒过程的发生。8月11日《英国医学杂志》报道了几起Oseltamivir药物不良反应病例。日本通过在各种哺乳动物中进行药理实验，认为CA04是可以作为抗击甲流的一线药物。8月13日，Virol J报道了聚维酮碘对抗人和禽的甲型流感病毒机制的最新研究成果。报道称，聚维酮碘是通过对凝血反应和唾液酸酶的影响达到抗病毒的作用。这一研究也进一步证实了聚维酮碘在控制人和禽甲型流感病毒传播中的效果。
为了防止甲流的进一步扩大，各国都在大力研制甲型H1N1流感疫苗，美国疾病控制与预防中心(CDC)的免疫实务咨询委员会(ACIP)提出新型A型流感(H1N1)病毒疫苗的使用指南。
美国研究者在对甲型H3N2和H1N1病毒感染的年龄分布研究中发现，H1N1病毒引起的流感多发在9岁左右的人群，比H3N2多发年龄23岁要年轻，并且对2009年4月至8月甲型H1N1大流行期间的死亡病例进行了统计分析发现，年龄小于5岁的儿童或是是患有慢性疾病的患者是有着较高的死亡风险；日本研究发现家居接触者在兄弟姐妹的攻击率明显高于父母，所以建立在家庭日常感染控制措施，以防止在家居接触和可能的病毒传播是非常重要的。
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--其它资料--
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑1.doc(包含最新猪H1N1流感病毒序列等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑2.doc(包含来源于猪的A型H1N1流感病毒药物敏感性等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑3.doc(包含流感病毒的抗药性：抗病毒制剂的合理使用等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑4.pdf(包含在人类中发现起源于猪的新型甲型H1N1流感病毒等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑5.doc(包含美国甲型H1N1流感病例的详细分析等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑6.doc(包含在欧洲高度流行金刚烷胺抗药性的猪A型流感病毒等内容)
甲型H1N1流感文献专辑一（打包下载）(包含黄芩素体内抗甲型流感病毒作用的研究、金银花提取物抗病毒的作用研究、中西药物结合抗甲型流感病毒作用的实验研究、中西医结合体外抗甲型流感病毒的实验研究、美国获得甲型流感病毒蛋白关键部位三维结构图等内容)
人感染猪H1N1流感病毒科技文献专辑7.doc(包含Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic等内容)
欧盟甲型H1N1 流感个案和汇总病例初步分析
甲型H1N1流感文献专辑二（外文）(包含Differences in patient age distribution between influenza A subtypes.等内容，有中文提要)
--回顾--
An Avian Connection as a Catalyst to the 1918-1919 Influenza Pandemic
Discovery and characterization of the 1918 pandemic influenza virus in historical context.mht
Reflections on the 1976 swine flu vaccination program.pdf
The origin of the 1918 pandemic influenza virus a continuing enigma -- Reid and Taubenberger 84 (9) 2285 -- Journal of General Virology.mht
--临床--
甲型H1N1流感疫苗研究进展（1）
Conserved amino acid markers from past influenza pandemic strains.pdf
THE UNITED STATES SWINE INFLUENZA IMMUNIZATION PROGRAM: A NEW YORK CITY PERSPECTIVE(pdf)
Epidemiology, clinical manifestations, and diagnosis of swine H1N1 influenza A.mht
Influenza virus.pdf
siv.php.pdf
Swine Influenza - Causes, Symptoms, Treatment, Diagnosis - Condition Factsheets - Body Health.mht
Swine Influenza A (H1N1) Infection in Two Children --- Southern California, March--April 2009.mht
Swine Influenza Virus.pdf
WHO.pdf
--诊断--
A comparison of diagnostic assays for the detection of type A swine influenza virus from nasal swabs and lungs.mht
ABOUT SWINE INFLUENZA.mht
Detection of influenza virus types A and B and type A.pdf
--治疗--
Generation and Characterization of Recombinant Influenza A (H1N1) Viruses Harboring Amantadine Resistance Mutations.mht
drug susceptibility of swine-origin influenza A (H1N1) viruses
--药物--
乐感清.mht
达菲 乐感清可有效缓解猪流感症状.doc
猪流感疫情暂无特效药 达菲和乐感清可应急.doc
揭开抗流感药达菲面纱.mht
达菲.mht
中国疾控中心专家甲型H1N1流感发病早期使用达菲可减轻症状.mht
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